菲罗门色谱柱的维护对于延长其使用寿命、保持分离效果和确保实验准确性至关重要。以下是系统化的维护策略及具体操作步骤:
1.过滤净化不可少
所有溶剂必须经过0.22μm滤膜过滤,建议使用带预过滤器的保护装置进行在线过滤;
水相流动相应脱气处理(超声震荡或在线脱气机),避免溶解氧导致填料氧化降解。
2.pH值严格控制
常规C18/C8柱建议保持pH范围2-8;若使用极*pH条件,须选用专用耐酸碱填料;
缓冲盐浓度不超过50mM以防止盐析出结晶堵塞管路。
3.避免颗粒物冲击
样品溶液需先经针筒过滤器过滤后再进样;
禁止直接注射浑浊溶液或含悬浮物的复杂基质。
二、菲罗门色谱柱周期性保养流程
1.基础冲洗程序(每月一次)
反向冲洗再生法
切换为高比例强溶剂,以正常流速反向冲洗60分钟;
此操作可有效去除累积的弱保留杂质,恢复柱效达初始值的95%以上。
过渡梯度平衡
完成分析后继续运行5%~10%梯度增量直至基线平稳,防止不同批次间交叉污染。
保存溶剂置换
长期闲置时改用同比例混合的甲醇/乙腈溶液保存,每周更换新鲜溶剂防止微生物滋生。
2.深度清洁方案(每季度实施)
针对严重污染情况可采用分段式清洗策略:
脂溶性污染物清除
依次用正己烷→异丙醇→二氯甲烷各冲洗30分钟,中间穿插空白运行检测残留;
注意:避免使用氯仿等强卤代烃类溶剂以免损伤封端键合相。
离子型残留分解
配制含0.1%三氟乙*的乙腈溶液,低流速循环清洗2小时;
后续用pH7缓冲液中和至中性后再过渡回常规流动相。
生物活性物质灭活
对蛋白质结合导致的失活现象,可用含0.05%叠氮钠的磷酸盐缓冲液浸泡过夜。
